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細胞系作為正?;蚰[瘤組織的模式細胞被廣泛應用于科學研究和藥物開發,然而很大一部分的細胞系被錯誤標記或被其它個體、組織、種系來源的細胞所替代。

隨著越來越多的頂級雜志社多次發文呼吁重視細胞交叉污染及錯誤辨識問題,選擇正確真實的細胞的重要性日趨提升,科研工作者在購買細胞前一定要再三思慮,多方尋找,選擇好的細胞供應商,選擇能提供細胞系鑒定報告的細胞供應者,否則即使你付出再多的努力也都是白白的付諸東流。

為什么要進行細胞系鑒定?

很多生物醫學領域的研究都采用培養細胞來進行,這些細胞可能是從細胞庫(如美國ATCC,American Type Culture Collection)得來,也可能是受贈于其它研究人員;尤其在中國,目前細胞的傳播太復雜、無序,很多都不是通過正規途徑獲得,如友情贈送等。

據統計,約有30%細胞系被交叉污染或錯誤辨識,因使用了交叉污染或錯誤辨識的細胞會導致研究結論錯誤、結果不可重復、臨床細胞治療失敗等。不僅浪費大量時間、精力和金錢,還可能造成不可挽回的災難性后果。為此,很多細胞庫現在都要對提交來的細胞系進行鑒定,并對細胞系之間的交叉污染進行監測。

各種雜志多次發出呼吁,要求研究者對細胞進行鑒定,NIH等權威機構也將細胞系鑒定作為基金申請的前提條件。

人源細胞的鑒定——STR鑒定

STR(Short Tandem Repeat,短串聯重復序列)基因分型已被ICLAC、ATCC等權威機構作為金標準應用于細胞鑒定,目前主要基于國際身份認證委員會的標準。依據該標準,可以通過多重熒光PCR技術,對人源8個STR位點以及1個性別決定位點進行檢測。

非人源細胞的鑒定——種屬鑒定

STR鑒定已經成為細胞身份確認的金標準,但是STR鑒定目前只適用于人及小鼠等少數幾個種屬的細胞,那么對于非人源的細胞我們應該如何去鑒定呢?

通常情況下,對于非人源細胞,我們首先要解決的是交叉污染的問題,確保使用的細胞是所需要的單一來源的細胞。而解決的方法就是細胞的種屬鑒定,目前常見的細胞種屬鑒定方法有染色體分析、同工酶分析、DNA條碼測序及PCR法等。這幾種方法中,最常用、最普遍的為PCR法。

PCR法鑒定細胞來源種屬

方法一:

針對常用種屬的細胞(人、大鼠、小鼠),使用種屬特異性的引物進行PCR擴增,用1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測目的條帶,來判斷細胞的種屬及是否存在不同種屬來源的細胞交叉污染。

鑒定細胞來源種屬

左圖為包含人源細胞污染的小鼠細胞;右圖為單一來源的小鼠細胞

方法二:

提取細胞DNA,用種屬復合引物MIX對動物線粒體COXI基因擴增,然后用遺傳分析儀對擴增產物進行毛細管電泳檢測和分析。

鑒定細胞來源種屬2

鑒定細胞來源種屬3

擴增結果顯示為大鼠細胞,且無其他種屬細胞交叉污染

種屬鑒定結果判定一般包含兩項:是否為單一種屬來源細胞以及來源細胞種屬。

除了必要的種屬鑒定外,在使用細胞之前可針對自身需求對細胞進行相關細胞特性的鑒定,如免疫熒光或流式檢測等。

普諾賽(Procell)是一家專注于研發和生產原代細胞、腫瘤細胞及細胞培養相關試劑產品的生物高科技企業,可以為各類研究機構提供符合標準規范的原代細胞、腫瘤細胞及相關實驗技術服務。

公司已對公司網站上提供的所有人源細胞系進行全面的STR鑒定,經STR鑒定通過的細胞系的鑒定報告將免費提供給所有下單訂購細胞的客戶!

此外,普諾賽所有在售大鼠細胞系,均應用PCR擴增→凝膠電泳跑膠進行種屬鑒定;對于所有在售小鼠細胞系,除了極少數采用PCR擴增→凝膠電泳跑膠之外,其它均應用STR鑒定,以判斷培養細胞是否存在種屬間的交叉污染,為您的實驗保駕護航。

普諾賽將始終確保為客戶提供的細胞具有真實性、正確性,無交叉污染,消除客戶因購買細胞而產生的質量和真假的后顧之憂,以最大的誠意提供信息最全面的細胞產品。

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